CODEXIS® ... Částka 106 (Vydáno: 31.05.2004) 331/2004 Sb. Vyhláška o opatřeních k zabezpečení ochrany proti zavlékání a šíření původce bakteriální kroužkovitosti bramboru a původce bakteriální hnědé hniloby
331/2004 Sb. Vyhláška o opatřeních k zabezpečení ochrany proti zavlékání a šíření původce bakteriální kroužkovitosti bramboru a původce bakteriální hnědé hniloby
Předmět úpravy Pojmy Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby Testování rozmnožovacího materiálu bramboru Účinnost Příloha č. 1 A. Metody diagnózy, detekce a identifikace původce kroužkovitosti Obecné zásady 1. Použití postupových diagramů 1.1. Postupový diagram pro diagnózu bakteriální kroužkovitosti v hlízách bramboru a v rostlinách bramboru vykazujících příznaky bakteriální kroužkovitosti 1.2. Postupový diagram pro diagnózu bakteriální kroužkovitosti ve vzorcích bezpříznakových hlíz bramboru 1.3. Postupový diagram pro diagnózu bakteriální kroužkovitosti ve vzorcích bezpříznakových rostlin bramboru 2. Vizuální vyšetření na přítomnost příznaků kroužkovitosti 2.1. Rostliny bramboru 2.2. Hlízy bramboru 3. Příprava vzorků 3.1. Hlízy bramboru 3.2. Rostliny bramboru 4. IF test Princip 5. Test FISH Princip 5.1. Fixace bramborového extraktu 5.2. Předhybridizace a hybridizace 5.3. Hodnocení FISH testu 6. PCR test Princip 6.1 Metody purifikace DNA 6.2 PCR 6.3. Analýza produktu PCR 7. Test na lilku vejcoplodém 8. Izolace Clavibacter michiganensis subsp. sepedonicus 8.1. Roztěr na selektivní médium 8.2. Čištění podezřelých kolonií 9. Identifikace 9.1. Nutriční a enzymatické identifikační testy 9.2. IF test 9.3. PCR test 9.4. FISH test 9.5. Analýza mastných kyselin (FAP) 9.6. BOX-PCR 10. Test patogenity Dodatek 1 - Laboratoře podílející se na optimalizaci a validaci protokolů Dodatek 2 - Příprava pozitivních a negativních kontrol pro vyšetření výkrojků testy PCR/IF a FISH Dodatek 3 - Pufry pro testovací postupy 1. Pufry pro extrakci 2. Pufry pro IF test Dodatek 4 - Stanovení koncentrace IF a FISH pozitivních buněk Dodatek 5 - Média pro izolaci a kultivaci C. m. subsp. sepedonicus Dodatek 6 - Validované protokoly a činidla pro PCR 1. Vícenásobný PCR protokol s interní PCR kontrolou (Pastrik, 2000) 2. Příprava nanášecího pufru 3. Pufr 10x TRIS-acetát-EDTA (TAE), pH 8,0 Dodatek 7 - Validovaná činidla pro FISH test Dodatek 8 - Pěstování lilku vejcoplodého Dodatek 9 - Gramovo barvení v Huckerově modifikaci (Doetsch, 1981) Literatura B. Metody diagnózy, detekce a identifikace původce hnědé hniloby Obecné zásady 1. Použití postupových diagramů 1.1. Postupový diagram pro diagnózu hnědé hniloby a bakteriálního vadnutí (Ralstonia solanacearum) hlíz bramboru a rostlin bramboru, rajčete a jiných hostitelských rostlin vykazujících příznaky hnědé hniloby nebo bakteriálního vadnutí 1.2. Postupový diagram pro detekci a identifikaci Ralstonia solanacearum ve vzorcích hlíz bramboru nevykazujících příznaky 2. Diagnóza původce hnědé hniloby 2.1. Příznaky 2.2. Rychlé screeningové testy 2.3. Postup při izolaci 2.4 Identifikační testy Ralstonia solanacearum 3. Detekce a identifikace původce hnědé hniloby ve vzorcích hlíz bramboru 3.1. Podrobné metody pro detekci a identifikaci Ralstonia solanacearum ve vzorcích bezpříznakových hlíz bramboru 3.2. Podrobné metody pro detekci a identifikaci R. solanacearum ve vzorcích bezpříznakových rostlin bramboru, rajčete nebo jiných hostitelských rostlin 4. Detekce a identifikace původce hnědé hniloby ve vodě 4.1 Postupový diagram pro detekci a identifikaci R. solanacearum ve vodě 4.2. Metody detekce a identifikace R. solanacearum ve vodě 5. Detekce a identifikace původce hnědé hniloby v půdě 5.1. Postupový diagram pro detekci a identifikaci R. solanacearum v půdě 5.2. Metody pro detekci a identifikaci R. solanacearum v půdě 6. Optimalizované protokoly pro detekci a identifikaci R. solanacearum 6.1. Diagnostické a detekční testy 6.2. Identifikační testy 6.3. Konfirmační test (test patogenity) Dodatek 1 - Laboratoře podílející se na optimalizaci a validaci protokolů Dodatek 2 - Média pro izolaci a kultivaci organismu R. solanacearum Dodatek 3 Dodatek 4 - Pufry pro testovací postupy 1. Pufry pro extrakci 2. Pufry pro IF test 3. Pufry pro účely nepřímého testu ELISA 4. Pufry pro účely testu DASI ELISA Dodatek 5 - Stanovení koncentrace IF a FISH pozitivních buněk Dodatek 6 - Validované protokoly a činidla pro PCR 1. Protokol PCR Seal et al. (1993) 2. Protokol PCR Pastrika a Maisse (2000) 3. Protokol pro multiplexní PCR s interní kontrolou (Pastrik et al., 2002) 4. Protokol PCR specifický pro biovar R. solanacearum (Pastrik et al, 2001) 5. Příprava nanášecího pufru 6. Pufr 10x TRIS-acetát-EDTA (TAE), pH 8,0 Dodatek 7 - Validovaná činidla pro FISH test Dodatek 8 - Pěstování lilku a rajčete Literatura Příloha č. 2 A. Rozsah informace o provedeném průzkumu výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby podle § 3 odst. 11 B. Uchování testovaných vzorků a partií a dokladování testování Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby 1. Způsob naložení s partií hostitelské rostliny označenou za zamořenou 2. Způsob naložení s partií hostitelské rostliny označenou za pravděpodobně zamořenou 3. Ošetření celých rostlin a posklizňových zbytků rostlin 4. Opatření v karanténním území po potvrzení výskytu původce kroužkovitosti 5. Opatření v karanténním území po potvrzení výskytu původce hnědé hniloby Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle § 5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle § 5 odst. 1 písm. b) 1. Pevný odpad ze zpracování hlíz brambor a rostlin rajčete 2. Odpadní vody při zpracování hlíz brambor a rostlin rajčete Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby 1. Mechanická očista objektů a předmětů a likvidace nečistot a zbytků 2. Mytí a dezinfekce objektů a předmětů 3. Asanace předmětů horkou vodou a párou 4. Dezinfekce zeminy a organických odpadů