Dodatek 9
Gramovo barvení v Huckerově modifikaci (Doetsch, 1981) 1)
Roztok krystalové violeti
Rozpustí se 2 g krystalové violeti v 20 ml 95% etanolu.
Rozpustí se 0,8 g šťavelanu amonného v 80 ml destilované vody.
Oba roztoky se smíchají.
Lugolův jódový roztok
Jód 1 g
Jodid draselný 2 g
Destilovaná voda 300 ml
Pevné látky se společně rozetřou pomocí tloučku v misce. Nasypou se do vody a míchají se v uzavřené nádobě do rozpuštění.
Safraninový roztok kontrastního barviva
Zásobní roztok:
Safranin O 2,5 g
95% etanol 100 ml
Zamíchá se a uloží se.
Ředění: 1:10 pro přípravu pracovního roztoku.
Postup barvení
1. Připraví se roztěry, vysuší se na vzduchu a fixují se zahřátím.
2. Sklíčko se zalije roztokem krystalové violeti a nechá se působit 1 minutu.
3. Krátce se omyje pod tekoucí vodou.
4. Zalije se Lugolovým jódovým roztokem a nechá se působit po dobu jedné minuty.
5. Opláchne se pod tekoucí vodou a vysuší se savým papírem.
6. Odbarvuje se pomocí po kapkách přidávaného 95% etanolu tak dlouho, pokud se vyplavuje barvivo, nebo ponořením za jemného pohybování do etanolu na dobu 30 sekund.
7. Opláchne se pod tekoucí vodou a vysuší se savým papírem.
8. Zalije se safraninovým roztokem a nechá se působit 10 s.
9. Opláchne se pod tekoucí vodou a vysuší se savým papírem.
Grampozitivní bakterie se zbarví fialově modře, gramnegativní bakterie se zbarví růžovočerveně.
------------------------------------------------------------------
1) Mohou se také použít komerčně dostupné roztoky nebo barvicí soupravy.