3. Pufry pro účely nepřímého testu ELISA
3.1. Dvojnásobný uhličitanový potahovací pufr, pH 9,6.
Na CO 6,36 g
2 3
NaHCO 11,72 g
3
Destilovaná voda 1,00 l
Rozpustí se složky, zkontroluje pH a steriluje autoklávováním při teplotě 121 °C po dobu 15 minut.
Pokud extrakt obsahuje vysoký podíl aromatických molekul, je možné jako antioxidant přidat siřičitan sodný (0,2 %).
3.2. Desetinásobný roztok chloridu sodného pufrovaný fosfátem (10 x PBS), pH 7,4
NaCl 80,0 g
KH PO 2,0 g
2 4
Na HPO . 12 H O 29,0 g
2 4 2
KCl 2,0 g
Destilovaná voda 1,00 l
3.3. PBS-Tween
10 x PBS 100 ml
10 % Tween 20 5 ml
Destilovaná voda 895 ml
3.4. Blokační pufr (musí být čerstvě připraven).
10 x PBS 10,0 ml
Polyvinylpyrrolidon-44000
(PVP-44) 2,0 g
10 % Tween 20 0,5 ml
Sušené mléko 0,5 g
Destilovaná voda doplnit do 100 ml
3.5. Roztok pro substrát alkalické fosfatázy, pH 9,8
Diethanolamin 97 ml
Destilovaná voda 800 ml
Rozpustí se a koncentrovanou HCl se upraví pH na 9,8.
Doplní se do 1 l destilovanou vodou.
Přidá se 0,2 g MgCl .
2
Rozpustí se dvě 5 mg tabletky fosfatázového substrátu (Sigma) v 15 ml roztoku.