4.2. Stanovení obsahu vitaminu A a vitaminu E
Účel, rozsah a princip
Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu vitaminu A a vitaminu E v krmivech a premixech.
Obsah vitaminu A a E se stanoví po alkalické hydrolýze hydroxidem draselným a následné extrakci hexanem a převedením do methylalkoholu metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC) na reverzní fázi s UV detekcí při 325 nm nebo fluorescenční detekcí (excitační vlnová délka 325 nm, emisní vlnová délka 480 nm) pro vitamin A a UV detekce při 282 nm nebo fluorescenční detekcí (excitační vlnová délka 292 nm, emisní vlnová délka 330 nm) pro vitamin E.
Výsledky se vyjadřují pro obsah vitaminu A
do 999 m.j./kg s přesností na 1 m.j./kg
od 1 000 do 9 999 m.j./kg s přesností na 10 m.j./kg
od 10 000 do 99 999 m.j./kg s přesností na 100 m.j./kg
od 100 000 do 999 999 m.j./kg s přesností na 1 000 m.j./kg
nad 1 000 000 m.j./kg s přesností na 10 000 m.j./kg
Opakovatelnost
Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu vitaminu A (UV detekce):
od 1 000 do 8 000 m.j./kg 25 % relat.
od 8 000 do 13 500 m.j./kg 2 000 m.j./kg
od 13 5000 do 40 000 m.j./kg 15 % relat.
od 40 000 do 300 000 m.j./kg 37 500 m.j./kg
od 300 000 do 1 600 000 m.j./kg 12,5 % relat.
od 1 600 000 do 2 600 000 m.j./kg 200 000 m.j./kg
od 2 600 000 do 4 000 000 m.j./kg 7,5 % relat.
Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu vitaminu E (UV detekce):
od 0,8 do 55 mg/kg 10 % relat.
od 55 do 100 mg/kg 5,5 mg/kg
od 100 do 250 mg/kg 5,5 % relat.
od 500 do 1 000 mg/kg 45 mg/kg
od 1 000 do 5 000 mg/kg 4,5 % relat.
od 5 000 do 7 500 mg/kg 225 mg/kg
více než 7 500 mg/kg 3 % relat.
Reprodukovatelnost
Rozdíl mezi dvěma výsledky zkoušek stejného vzorku prováděnými ve dvou laboratořích nesmí překročit při obsahu vitaminu A (UV detekce):
od 1 000 do 100 000 m.j./kg 25 % relat.
od 100 000 do 125 000 m.j./kg 25 000 m.j./kg
od 125 000 do 375 000 m.j./kg 20 % relat.
od 375 000 do 600 000 m.j./kg 75 000 m.j./kg
od 600 000 do 800 000 m.j./kg 12,5 % relat.
od 800 000 do 1 000 000 m.j./kg 100 000 m.j./kg
od 1 000 000 m.j./kg 10 % relat.
Rozdíl mezi dvěma výsledky zkoušek stejného vzorku prováděnými ve dvou laboratořích nesmí překročit při obsahu vitaminu E (UV detekce):
od 0,8 do 25 mg/kg 40 % relat.
od 25 do 50 mg/kg 10 mg/kg
od 50 do 150 mg/kg 20 % relat.
od 150 do 200 mg/kg 30 mg/kg
od 200 do 500 mg/kg 15 % relat.
od 500 do 750 mg/kg 75 mg/kg
nad 750 mg/kg 10 % relat.
Mez stanovitelnosti
Mez stanovitelnosti pro vitamin A je 250 m.j./kg pro fluorescenční detekci, pro UV detekci 1 000 m.j./kg. Mez stanovitelnosti pro vitamin E je 0,1 mg/kg pro fluorescenční detekci, pro UV detekci 0,8 mg/kg.