2 Data a vyhodnocení
Naměřené hustoty buněk ve zkušební kultuře a v kontrolách jsou spolu s příslušnými koncentracemi a sledovanými parametry zapisovány do tabulek. Sestrojí se růstová křivka pro každou zkoušenou koncentraci a kontrolu v podobě grafu střední hustoty buněk v závislosti na čase.
Vztah mezi koncentrací a účinkem je stanovován dvěma následujícími postupy. Některé látky mohou při nízkých koncentracích stimulovat růst. V úvahu by měla být brána jenom data indikující inhibici mezi 0 a 100 %.
2.1 Srovnání ploch pod růstovou křivkou
Plocha mezi růstovou křivkou a vodorovnou čarou N = No se vypočítá podle následující rovnice:
N - N N + N - 2N N + N - 2N
1 2 1 2 0 n-1 n 0
A = -------- .t + ------------ .(t -t ) + ... + -------------- .(t - t )
1 2 1 n n-1
2 2 2
kde je
A - plocha
-1
N - počet buněk.ml v čase t (na počátku zkoušky)
o o
N - změřená hustota buněk v čase t
1 1
N - změřená hustota buněk v čase t
n n
t - doba prvního měření od počátku zkoušky
1
t - doba n-tého měření od počátku zkoušky
n
n - počet měření od počátku zkoušky
Inhibice růstu v % (I ) pro každou koncentraci zkoušené látky se vypočítá
A
podle rovnice:
A - A
c t
I = --------- . 100
a A
c
kde
A = plocha mezi růstovou křivkou kontrolní zkoušky a horizontální linií
c
N = N ,
0
A = plocha mezi růstovou křivkou při koncentraci t a horizontální linií
t
N = N .
0
Hodnoty Ia se nanesou na semilogaritmický nebo na semilogaritmicko-probitový papír proti jednotlivým koncentracím. Po vynesení bodů na papír se tyto spojí od oka nebo vypočtenou regresní přímkou.
Hodnota EC se odečítá na průsečíku regresní čáry a rovnoběžky s osou x v
50
bodě I = 50 %. Abychom tuto hodnotu označili jednoznačně podle použité
a
metody vyhodnocení, doporučuje se použít symbol E C . Důležité je,
b 50
že hodnota E C je spojena s označením příslušné exposiční doby tj.E C
b 50 b 50
(0-72h).
2.2 Srovnání rychlosti růstu
Průměrná specifická rychlost růstu (μ) pro exponenciálně rostoucí kultury se vypočte jako:
lnN - lnN
n 0
μ = -------------
t - t
n 0
kde t je čas počátku zkoušky.
0
Procento inhibice specifické rychlosti růstu při každé koncentraci zkoušené
látky (I ) se vypočte podle vzorce:
μt
μ - μ
c t
I = ---------- . 100
μt μ
c
kde
μ = průměrná specifická rychlost růstu kontrol,
c
μ = průměrná specifická rychlost růstu při koncentraci t.
t
Snížený průměrný růst v % ve srovnání s kontrolní hodnotou, při všech
koncentracích zkoušené látky se nanese proti logaritmu koncentrace. Z takto
vzniklého grafického znázornění lze odečíst hodnoty EC . Pro přesné označení
50
bodu EC , zjištěného touto metodou se doporučuje použít symbol E C . Musí
50 r 50
se uvést časy pozorování, tzn. hodnoty vztažené k dobám 0 - 72 h se označí
symbolem E C (0 - 72 h).
r 50
Poznámka. Specifická rychlost růstu je logaritmický výraz, nepatrné změny
rychlosti růstu mohou odpovídat velkým změnám biomasy. Hodnoty E C a E C
b r
jsou proto numericky nesrovnatelné.
2.3 Výpočet NOEC
Hodnota NOEC se stanoví vhodnou statistickou metodou pro mnohočetné srovnávání vzorků (např. analýza variance a Dunnettův test) s využitím jednotlivých hodnot ploch oblastí pod růstovými křivkami A (viz bod 2.1) nebo specifických rychlostí růstu μ (viz bod 2.2).