D. Vlastní analýza
1. Připraví se 6 inkubačních nádobek. 1,00 g vzorku (s přesností 0,1 mg) se naváží do 4 inkubačních nádobek. Zbývající dvě nádobky bez navážky vzorku se použijí pro slepý pokus (blank) při stanovení bílkovin a při stanovení popela. Do každé nádobky se přidá 50 ml fosfátového nárazníkového roztoku (pH 6,0) a obsah se promíchá.
2. Do všech nádobek se přidá 50 μl roztoku α-amylázy (Bioquant Merck) a směs se důkladně promíchá. Nádobky se přikryjí hliníkovou fólií a inkubují se 30 minut v lázni s vroucí vodou.
3. Po ochlazení obsahu nádobek na teplotu místnosti se pH upraví na 7,5 (± 0,1) za použití vodného roztoku NaOH (0,275 mol/l).
4. Do nádobek se přidá 50 μl roztoku proteázy (Bioquant Merck), směs se promíchá, nádobky se přikryjí hliníkovou fólií a inkubují se při 60 °C po dobu 30 minut ve vodní lázni za stálého třepání. Doba inkubace začíná okamžikem, kdy obsah nádobek dosáhl 60 °C.
5. Směs je opět ochlazena na teplotu místnosti a pH se upraví na 4,5 (± 0,2) pomocí vodného roztoku HCL (0,325 mol/l).
6. Přidá se 150 μl roztoku amyloglukozidázy (Bioquant Merck), směs se promíchá, nádobky se přikryjí opět hliníkovou fólií a směs se inkubuje 30 minut při 60 °C ve vodní lázni za stálého třepání (inkubace začíná tehdy, když obsah v nádobce dosáhne 60 °C).
7. Rozpustná vláknina se srazí přidáním 280 ml etanolu (95%), který byl předehřátý na 60 °C (objem měřen před ohřevem). Obsah se promíchá.
8. Předem zvážený kelímek s Celitem 545 se překlopí do inkubační nádobky a nasadí na zařízení FIBERTEC E. Po spuštění vývěvy je obsah nádobky s Celitem defiltrován přes fritu kelímku. Kapalný podíl se jímá do další inkubační nádoby umístěné ve spodní části filtračního modulu.
9. Sraženina s celitem na kelímku se přemístí do druhé části filtračního zařízení. Za použití vakua se promývá 3 x 20 ml etanolu (78%), 2 x 10 ml etanolu (95%) a 2 x 10 ml acetonu.
10. Zbytek v kelímku se suší přes noc při 150 °C v sušárně.
11. Po ochlazení v exikátoru se kelímky zváží s přesností na 0,1 mg. Odečtení váhy kelímku s Celitem dává hmotnost zbytku.