3. Závěrečná zpráva
Zpráva o průběhu pokusu
Ve zprávě o průběhu pokusu je třeba uvést tyto informace:
Testovaná látka:
- identifikační údaje a číslo CAS, je-li známo,
- fyzikální povaha a čistota,
- fyzikálně-chemické vlastnosti, jež jsou k provedení testu důležité,
stabilita a fotostabilita, jsou-li známy.
Rozpouštědlo:
- zdůvodnění volby daného rozpouštědla,
- rozpustnost testované látky v tomto rozpouštědle,
- procentický podíl rozpouštědla v působícím médiu (EBSS nebo PBS).
Buňky:
- typ a zdroj buněk,
- nepřítomnost mykoplazmat,
- číslo buněčné pasáže, je-li známo,
- citlivost buněk vůči záření UVA stanovená pomocí ozařovacího zařízení, jež se v testu na fototoxicitu 3T NRU in vitro používá.
Podmínky pokusu (a) - inkubace před ovlivněním a po něm:
- typ a složení kultivačního média,
- podmínky inkubace (koncentrace CO2, teplota, vlhkost),
- doba inkubace (zpracování před ni a po ní).,
Podmínky pokusu (b) - ovlivnění látkou:
- zdůvodnění volby koncentrací testované látky, které se použijí v přítomnosti ozařování UV/VIS zářením a bez něj,
- v případě omezené rozpustnosti testované látky a absence cytotoxicity zdůvodnění nejvyšší testované koncentrace,
- typ a složení působícího média (pufrovaný solný roztok),
- doba ovlivňování látkou.
Podmínky pokusu (c) - ozařování:
- zdůvodnění volby daného světelného zdroje,
- spektrální charakteristika záření světelného zdroje,
- charakteristiky propustnosti/absorpce použitého filtru (filtrů),
- charakteristika radiometru a podrobnosti o jeho kalibraci,
- vzdálenost světelného zdroje od testovaného systému,
- iradiance UVA (v mW/cm2) při této vzdálenosti,
- doba expozice UV/VIS záření,
- dávka záření UVA (iradiance x čas) v J/cm2,
- teplota buněčných kultur během ozařování a kultur souběžně uchovávaných v temnu.
Podmínky pokusu (d) - test NRU:
- složení média s NR,
- doba inkubace s NR,
- inkubační podmínky (koncentrace CO2, teplota, vlhkost),
- podmínky extrakce NR (extrakční činidlo, doba extrakce),
- vlnová délka, při které se spektrofotometricky odečítala optická hustota NR,
- druhá vlnová délka (referenční), byla-li použita,
- složení srovnávacího roztoku pro spektrofotometrii (blanku), pokud byl použit.
Výsledky:
- životaschopnost buněk při jednotlivých koncentracích testované látky, vyjádřená v procentech vůči průměrné životaschopnosti kontrol,
- křivky koncentrace-odezva (koncentrace testované látky vs relativní životaschopnost buněk) získané souběžnými experimenty +UVA a -UVA,
- analýza křivek koncentrace-odezva: podle možnosti výpočet hodnot EC50 (+UVA) a EC50 (-UVA),
- porovnání obou křivek koncentrace-odezva získaných za použití ozařování UV/VIS světlem - výpočtem buď fotoiritačního faktoru (PIF) nebo středního fotoefektu (MPE),
- klasifikace fototoxického potenciálu,
- kritéria akceptovatelnosti testu (a) - souběžná negativní kontrola:
- absolutní životaschopnost (optická denzita extraktu NR) ozářených a neozářených buněk,
- historické údaje negativních kontrol, průměr a směrodatná odchylka,
- kritéria akceptovatelnosti testu (b) - souběžná pozitivní kontrola:
- hodnoty EC50 (+UVA), ec50(-UVA) a PIF látky použité pro pozitivní kontrolu,
- historické údaje látky použité pro pozitivní kontrolu: hodnoty EC50 (+UVA), EC50(-UVA) a PIF, průměry a směrodatné odchylky.
Diskuse výsledků.
Závěry.
Obrázek - obrázek č.3
******************************************************************