Příloha č. 47
Příprava vzorků a požadavky na metody zkoušení používané pro úřední kontrolu dodržování maximálních limitů fusariových toxinů v potravinách
1. Předběžná opatření
Vzhledem k tomu, že rozložení fusariových toxinů je velmi nestejnoměrné, musí být přípravě laboratorních vzorků a zejména homogenizaci vzorků věnována zvýšená pozornost.
Veškeré odebrané množství potraviny se použije k přípravě zkušebního vzorku.
2. Zpracování vzorku obdrženého laboratoří
Každý laboratorní vzorek se jemně rozemele a důkladně promísí postupem, kterým se dosáhne úplné homogenizace.
Pokud se maximální limit vztahuje na sušinu, stanoví se obsah sušiny výrobku v části homogenizovaného vzorku metodou, která prokazatelně umožňuje přesné stanovení sušiny.
3. Rozdělení vzorků pro zkoušení za účelem potvrzení výsledku a obhajoby
Duplikátní vzorky pro zkoušení za účelem potvrzení výsledku, obhajoby v obchodním sporu a pro rozhodčí zkoušení se odeberou ze zhomogenizovaného vzorku.
4. Metody zkoušení a požadavky na řízení laboratoře
4.1 Definice
Nejběžnější definice, které musí laboratoř použít:
r = opakovatelnost: hodnota, pod níž bude podle očekávání
s danou pravděpodobností (obvykle 95 %) ležet
absolutní hodnota rozdílu výsledků 2 samostatných
stanovení za podmínek opakovatelnosti (tj. stejný
vzorek, tentýž pracovník, tatáž aparatura, tatáž
laboratoř, stanoveno krátce po sobě); r = 2,8 x s .
r
s = směrodatná odchylka vypočtená z výsledků získaných
r za podmínek opakovatelnosti.
RSD = relativní směrodatná odchylka vypočtená z výsledků
r získaných za daných podmínek opakovatelnosti
_
[(s /x) x 100].
r
R = reprodukovatelnost: hodnota, pod níž bude podle
očekávání s danou pravděpodobností (obvykle 95 %)
ležet absolutní hodnota rozdílu výsledků dvou
samostatných stanovení za podmínek reprodukovatelnosti
(tj. u stejného materiálu získaného pracovníky různých
laboratoří, za použití standardizované zkušební
metody); R = 2,8 x s .
R
s = směrodatná odchylka vypočtená z výsledků získaných
R za podmínek reprodukovatelnosti.
RSD = relativní směrodatná odchylka vypočtená z výsledků
R získaných za podmínek reprodukovatelnosti
_
[(s /x) x 100].
R
4.2 Obecné požadavky
Metody zkoušení použité pro účely kontroly potravin musí být v souladu s § 9.
4.3 Zvláštní požadavky
4.3.1 Pracovní charakteristiky
Nejsou-li přímo použitelným předpisem Evropských společenství stanoveny zvláštní metody, laboratoře zvolí validovanou metodu za předpokladu, že zvolená metoda splňuje pracovní charakteristiky uvedené v tabulkách 1, 2, 3 a 4.
Tabulka 1: Pracovní charakteristika pro deoxynivalenol
+---------------------+------------------------------------+
| Množství μg/kg | deoxynivalenol |
| +---------+---------+----------------+
| | RSD % | RSD % | Výtěžnost % |
| | r | R | |
+---------------------+---------+---------+----------------+
| > 100,00 - ≤ 500,00 | ≤ 20,00 | ≤ 40,00 | 60,00 - 110,00 |
+---------------------+---------+---------+----------------+
| > 500,00 | ≤ 20,00 | ≤ 40,00 | 70,00 - 120,00 |
+---------------------+---------+---------+----------------+
Tabulka 2: Pracovní charakteristika pro zearalenon
+---------------------+------------------------------------+
| Množství μg/kg | zearalenon |
| +---------+---------+----------------+
| | RSD % | RSD % | Výtěžnost % |
| | r | R | |
+---------------------+---------+---------+----------------+
| ≤ 50,00 | ≤ 40,00 | ≤ 50,00 | 60,00 - 120,00 |
+---------------------+---------+---------+----------------+
| > 50,00 | ≤ 25,00 | ≤ 40,00 | 70,00 - 120,00 |
+---------------------+---------+---------+----------------+
Tabulka 3: Pracovní charakteristika pro fumonisin B a B
1 2
+---------------------+------------------------------------+
| Množství μg/kg | Fumosin B nebo B |
| | 1 2 |
| +---------+---------+----------------+
| | RSD % | RSD % | Výtěžnost % |
| | r | R | |
+---------------------+---------+---------+----------------+
| ≤ 500,00 | ≤ 30,00 | ≤ 60,00 | 60,00 - 120,00 |
+---------------------+---------+---------+----------------+
| > 500,00 | ≤ 20,00 | ≤ 30,00 | 70,00 - 120,00 |
+---------------------+---------+---------+----------------+
Tabulka 4: Pracovní charakteristiky pro T-2 a HT-2 toxin
+---------------------+------------------------------------+
| Množství μg/kg | T-2 toxin |
| +---------+---------+----------------+
| | RSD % | RSD % | Výtěžnost % |
| | r | R | |
+---------------------+---------+---------+----------------+
| 50,00 - 250,00 | ≤ 40,00 | ≤ 60,00 | 60,00 - 130,00 |
+---------------------+---------+---------+----------------+
| > 250,00 | ≤ 30,00 | ≤ 50,00 | 70,00 - 130,00 |
+---------------------+---------+---------+----------------+
+---------------------+------------------------------------+
| Množství μg/kg | HT-2 toxin |
| +---------+---------+----------------+
| | RSD % | RSD % | Výtěžnost % |
| | r | R | |
+---------------------+---------+---------+----------------+
| 100,00 - 200,00 | ≤ 40,00 | ≤ 60,00 | 60,00 - 130,00 |
+---------------------+---------+---------+----------------+
| > 200,00 | ≤ 30,00 | ≤ 50,00 | 70,00 - 130,00 |
+---------------------+---------+---------+----------------+
Detekční limity použitých metod se neuvádí, protože přesnost je uvedena pro uvažované koncentrace.
Přesnost metody odpovídá hodnotě vypočtené z Horwitzovy rovnice:
(1-0,5logC)
RSD = 2
R
kde:
- RSD je relativní směrodatná odchylka vypočtená z výsledků
R získaných za podmínek reprodukovatelnosti
_
[(s /x) x 100],
R
- C je poměr koncentrací
(tj. 1 = l00 g/l00 g, 0,001 = 1,000 mg/kg).
Toto je zobecněná rovnice pro přesnost, u níž se ukázalo, že u většiny rutinních metod analýzy nezáleží na analytu a matrici, nýbrž pouze na koncentraci.
4.3.2 Přístup založený na vhodnosti pro daný účel
K hodnocení přijatelnosti metod zkoušení lze použít alternativní přístup založený na vhodnosti pro daný účel, v jehož rámci se vymezí pouze funkce vhodnosti jako jediný parametr, pokud existuje omezený počet plně validovaných metod zkoušení. Funkce vhodnosti je funkce nejistoty, která stanoví nejvyšší hodnotu nejistoty, jež je považována za vhodnou pro daný účel.
Vzhledem k omezenému počtu metod zkoušení, které jsou plně validovány mezilaboratorní zkouškou, zejména pro stanovení T-2 a HT-2 toxinu, se použije přístup založený na funkci nejistoty, kterým se stanoví nejvyšší přijatelná nejistota, také k posouzení vhodnosti pro daný účel metody zkoušení, kterou laboratoř použije. Laboratoř může použít metodu, která poskytuje výsledky s maximální standardní nejistotou. Maximální standardní nejistota se vypočítá pomocí následující rovnice:
2 2
U = √(LOD/2) + (α x C)
f
kde:
U je maximální standardní nejistota,
f
LOD je mez detekce metody,
C je příslušná koncentrace(μg/kg),
α je konstantní číselný faktor používaný v závislosti
na hodnotě C. Hodnoty, které mají být použity, jsou
uvedeny v tabulce 5.
Jestliže metoda zkoušení poskytuje výsledky s nejistotou měření menší než maximami standardní nejistota, bude metoda vhodná do stejné míry jako metoda, která splňuje pracovní charakteristiky uvedené v tabulkách.
Tabulka 5: Číselné hodnoty, které mají být
v závislosti na příslušné
koncentraci použity pro α jako
konstantu v rovnici uvedené
v tomto bodě
+--------------------------+------------+
| C (μg/kg) | α |
+--------------------------+------------+
| ≤ 50,00 | 0,20 |
+--------------------------+------------+
| 51,00 - 500,00 | 0,18 |
+--------------------------+------------+
| 501,00 - 1000,00 | 0,15 |
+--------------------------+------------+
| 1001,00 - 10000,00 | 0,12 |
+--------------------------+------------+
| > 10000,00 | 0,10 |
+--------------------------+------------+
4.4 Výpočet výtěžnosti a uvádění výsledků
Výsledky zkoušky se uvedou s korekcí nebo bez korekce na výtěžnost. Musí být uveden způsob uvedení výtěžnosti a její hodnota. Výsledek zkoušky s korekcí na výtěžnost se použije pro kontrolu dodržení limitu.
Výsledek zkoušky musí být uveden ve tvaru (x ± U), kde x je výsledek zkoušky a U je rozšířená nejistota měření.
4.5 Požadavky na laboratoře
Laboratoře musí splňovat požadavky zvláštního právního předpisu *).
------------------------------------------------------------------
*) Například § 3 odst. 3 zákona č. 146/2002 Sb., o Státní zemědělské a potravinářské inspekci a o změně některých souvisejících zákonů, ve znění pozdějších předpisů.
******************************************************************