2. HP 14 Ekotoxický
Přiřazení nebezpečné vlastnosti HP 14 Ekotoxický je možné provést na základě výpočtové metody podle přímo použitelného předpisu Evropské unie o nebezpečné vlastnosti ekotoxicita 11) nebo na základě zkoušky provedené způsobem uvedeným v tabulce č. 1.1 nebo 1.2. V případě hodnocení na základě zkoušky se nebezpečná vlastnost ekotoxicita přiřadí odpadu, u něhož dojde za podmínek zkoušky k překročení limitních hodnot uvedených v příslušné tabulce alespoň pro jeden zkušební organismus. Pokud bylo v konkrétním případě provedeno hodnocení výpočtovou metodou i hodnocení na základě zkoušky, přiřazuje se nebezpečná vlastnost na základě výsledku zkoušky.
Tabulka č. 1.1: Požadavky na výsledky zkoušek ekotoxicity
+---------------------------+------------+---------------------------+
| Zkušební | Doba | Limitní hodnoty |
| organismus | působení | |
+---------------------------+------------+---------------------------+
| Ryba | 96 hodin | -1 |
| Poecilia reticulata, nebo | | LC50 ≤ 10 ml.l |
| Brachydanio rerio | | |
+---------------------------+------------+---------------------------+
| Perloočka | 48 hodin | -1 |
| Daphnia magna Straus | | EC50 ≤ 10 ml.l |
+---------------------------+------------+---------------------------+
| Řasa | 72 hodin | -1 |
| Desmodesmus subspicatus | | IC50 ≤ 10 ml.l |
+---------------------------+------------+---------------------------+
| Semeno | 72 hodin | -1 |
| Sinapis alba | | IC50 ≤ 10 ml.l |
+---------------------------+------------+---------------------------+
Vysvětlivky k tabulce č. 1.1:
LC 50 - koncentrace, která způsobí úhyn 50 % zkušebních ryb ve zvoleném časovém úseku.
EC 50 - koncentrace, která způsobí úhyn nebo mobilizaci 50 % zkušebních organismů (Daphnia magna).
IC 50 - koncentrace, která způsobí 50 procentní změnu růstové rychlosti řasové kultury nebo 50 procentní inhibici růstu kořene Sinapis alba ve srovnání s kontrolou ve zvoleném časovém úseku.
Tabulka č. 1.2: Požadavky na výsledky zkoušek ekotoxicity
+---------------------------+------------+---------------------------+
| Zkušební | Doba | Limitní hodnoty |
| organismus | působení | |
+---------------------------+------------+---------------------------+
| Bakterie | 15 minut a | neprokáže se ve zkoušce |
| Vibrio fischeri | 30 minut | inhibice světelné emise |
| | | bakterií větší než 20 % |
| | | při expozici 15 minut ani |
| | | při expozici 30 minut |
+---------------------------+------------+---------------------------+
| Perloočka | 48 hodin | procento imobilizace |
| Daphnia magna Straus | | perlooček nesmí ve |
| | | zkoušce přesáhnout 20 % |
+---------------------------+------------+---------------------------+
| Řasa | 72 hodin | neprokáže se ve zkoušce |
| Desmodesmus subspicatus | | inhibice nebo stimulace |
| | | růstu řas větší než 20 % |
| | | ve srovnání s kontrolou |
+---------------------------+------------+---------------------------+
| Salát | 120 hodin | neprokáže se ve zkoušce |
| Lactuca sativa | | inhibice nebo stimulace |
| | | růstu kořene salátu větší |
| | | než 30 % ve srovnání s |
| | | kontrolou |
+---------------------------+------------+---------------------------+
Vysvětlivky k tabulce č. 1.2:
1. Zkoušky s bakteriemi, perloočkou a řasami se provádějí s vodným výluhem pevného odpadu, zkouška se salátem se provádí s pevným odpadem.
2. Koncentrace zkoušeného vzorku pevného odpadu činí 10 % hm. vzorku, tj. 100 g sušiny odpadu + 900 g sušiny umělé půdy. Umělá půda slouží zároveň jako kontrola.
3. Vodný výluh se používá ředěný (při koncentraci 100 ml/l) s přidáním stejných živin a ve stejné koncentraci jako v kontrole, podle odpovídající technické normy. V případě zkoušky s luminiscenčními bakteriemi Vibrio fischeri to znamená, že se k 0,5 ml ředěného vzorku (koncentrace 200 ml/l) s upravenou salinitou podle pokynů uvedených v technické normě ČSN EN ISO 11348 -1,2 ze dne 5. května 2009 Jakost vod - Stanovení inhibičního účinku vzorků vod na světelnou emisi Vibrio fischeri (Zkouška na luminiscenčních bakteriích) - část 1: Metoda s čerstvě připravenými bakteriemi, část 2: Metoda se sušenými bakteriemi přidá 0,5 ml suspenze bakterií (zkoušená koncentrace je 10 % objemu). V případě zkoušky s řasami Desmodesmus subspicatus se jedná o vodný výluh o koncentraci 100 ml/l, s přídavkem živin, přídavek řasové suspenze nesmí být větší než 1 % objemu zkoušeného vzorku.
4. Příprava výluhu:
Při přípravě výluhu se postupuje podle ČSN EN 12457-4 ze dne 1. července 2003 Charakterizace odpadů - Vyluhování - Ověřovací zkouška vyluhovatelnosti zrnitých odpadů a kalů - Část 4: Jednostupňová vsádková zkouška při poměru kapalné a pevné fáze 10 l/kg pro materiály se zrnitostí menší než 10 mm (bez zmenšení velikosti částic, nebo s ním).
Pro filtraci se použije papírový filtr se středním až rychlým průtokem.
5. Doplňující podmínky pro provedení zkoušky se zkušebním organismem Salát Lactuca sativa podle technické normy ČSN EN ISO 11269-1 ze dne 1. srpna 2013 Kvalita půdy - Stanovení účinků znečišťujících látek na půdní flóru - Část 1: Metoda měření inhibice růstu kořene:
Zkouška se provede se semeny salátu hlávkového k rychlení Lactuca sativa var. capitata, Safír. Pro zkoušku se vybírají nepoškozená semena stejné velikosti, chemicky neošetřená. Semena salátu se nechají předklíčit ve zkušební nádobě na vrstvě filtračního papíru zvlhčeného vodou po dobu 24 h až 48 h, při laboratorní teplotě, bez regulace osvětlení. Pro zkoušku se vybírají naklíčená semena, popř. s kořínkem, který je kratší než 2 mm.
Do zkušební nádoby se naváží 200 g až 300 g zvlhčeného zkoušeného vzorku odpadu (ředěného v hmotnostním poměru 1:9 umělou půdou) nebo kontroly (umělá půda). Výška vrstvy vzorku v nádobě musí být minimálně 3 cm. Rozvrhne se pravoúhlá síť, např. 5 x 3 body. Do vytvořených jamek asi 0,5 cm až 1 cm hlubokých se pinzetou rovnoměrně rozmístí po 15 naklíčených semenech salátu, kořínkem směrem dolu. Semena se ke vzorku přitlačí, vzorkem se nezakrývají a takto připravené nádoby uzavřené víkem se umístí do termostatu s teplotou 24 °C ± 2 °C bez přístupu světla.
Zkouška se provádí ve třech paralelních stanoveních. Po 120 h ± 2 h inkubace se salát šetrně oddělí od vzorku a změří se a zaznamenává délka všech kořenů ve zkoušeném vzorku a v kontrole s přesností na 1 mm.
Základem pro hodnocení zkoušky inhibice růstu je průměrná délka kořene zjištěná v kontrole a zkoušeném vzorku. Jestliže předklíčené semeno nevytvoří kořínek, započítává se tato hodnota do střední hodnoty jako nulová. Variační koeficient paralelních stanovení nesmí překročit 20 %. Průměrná délka kořene salátu v kontrole musí být minimálně 15 mm.
Doporučuje se pravidelně provádět zkoušku s referenční látkou. Stanovuje se
EC
50
kyseliny borité za použití umělé půdy, přičemž doporučená hodnota
EC
50
se pohybuje v rozmezí
-1 -1
300,0 mg.kg až 650,0 mg.kg .
suš suš
Aby se prokázala jednotnost laboratorních zkušebních podmínek, jsou do každé zkoušky inhibice růstu kořene zahrnuty tři zkušební nádoby naplněné pískem, po 6 semenech předklíčeného salátu.
Vyhodnocení zkoušky se provádí v souladu s normou ČSN EN ISO 11269-1. Doporučená střední hodnota délky kořene je 30 mm.