5. Postup
5.1 Příprava vzorku
Do odměrné baňky na 100 ml se přesně naváží množství vzorku, které obsahuje asi 100 mg chininu, rozpustí se a doplní po rysku methanolem (3.3).
Baňka se uzavře a ponechá jednu hodinu při laboratorní teplotě v ultrazvukové lázni (4.2). Obsah se zfiltruje (4.3) a filtrát se použije pro chromatografii.
5.2 Chromatografie na tenké vrstvě
Na desku (3.1) se nanese 1,0 μl standardního roztoku (3.10) a 1,0 μl roztoku vzorku (5.1). Chromatogram se vyvíjí do výšky 150 mm v komoře předem nasycené rozpouštědlem (3.2).
5.3 Detekce
5.3.1 Deska se vysuší při pokojové teplotě.
5.3.2 Postříká se činidlem 3.6.
5.3.3 Deska se nechá jednu hodinu schnout při laboratorní teplotě.
5.3.4 Pozoruje se ve světle UV lampy nastavené na vlnovou délku 360 nm. Chinin se projeví jako intenzivně fluoreskující modrá skvrna.
Jako příklad jsou v následující tabulce uvedeny hodnoty
R
f
hlavních chininových alkaloidů při vyvíjení chromatogramu rozpouštědlem 3.2:
+---------------+----------+
| Alkaloid | R |
| | f |
+---------------+----------+
| Chinin | 0,20 |
+---------------+----------+
| Chinidin | 0,29 |
+---------------+----------+
| Cinchonin | 0,33 |
+---------------+----------+
| Cinchonidin | 0,27 |
+---------------+----------+
| Hydrochinidin | 0,17 |
+---------------+----------+
5.3.5 Pro další potvrzení přítomnosti chininu se deska vystaví asi na jednu hodinu parám bromu (3.7). Fluorescence zmizí. Je-li tatáž deska vystavena parám amoniaku (3.8), skvrny se znovu objeví v hnědé barvě a pod světlem UV lampy (360 nm) je pozorovatelná nažloutlá fluorescence. Mez detekce: 0,1 μg chininu.