A.
Postupy získávání, posuzování a zpracování spermatu, uchovávání a výdeje inseminačních dávek
1. odběr spermatu
1.1 Odběr spermatu se provádí podle plánu stanoveného individuálně pro každého býka, po řádném vyčištění býka a omytí a usušení předkožky, pomocí umělé vagíny vyjmuté z termostatu o teplotě cca 40 °C, jejíž vložka je ověřená na nepropustnost vody a vzduchu.
1.2 Všechny pomůcka přicházející bezprostředně do styku se spermatem musí být sterilní.
1.3 Po odběru je sběrač se spermatem, označený značkou a číslem státního registru plemenného býka, oddělen a předán do laboratoře k hodnocení a zpracování. Mikroskopické posouzení čerstvého spermatu se provádí do 10 minut po odběru.
2. Hodnocení spermatu
Hodnocení spermatu se provádí na základě posouzení jednotlivých vlastností spermatu podle charakteristických znaků a projevů metabolizmu při teplotě 20 až 25 °C.
+----------------+---------------------------------+--------------------------------------------+
| Hodnocení: | hodnotí se: | způsob hodnocení: |
+----------------+---------------------------------+--------------------------------------------+
| čerstvého | zdravotní nezávadnost | nejméně jednou za půl roku veterinárním |
| spermatu | spermat u odebíraných býků | vyšetřením |
| +---------------------------------+--------------------------------------------+
| | objem | měřením nebo vážením u každého ejakulátu |
| | | s přesností na 1 cm3 (g) |
| +---------------------------------+--------------------------------------------+
| | barva, konzistence a pach | smyslovým posouzením |
| +---------------------------------+--------------------------------------------+
| | obsah přimísenin | smyslovým posouzením ve sběrači a |
| | | mikroskopicky |
| +---------------------------------+--------------------------------------------+
| | hustota spermatu | fotometrem u každého ejakulátu (kontrolní |
| | | propočty případně kalibrace přístrojů |
| | | se provádění v Bürkerově komůrce) |
| +---------------------------------+--------------------------------------------+
| | aktivita spermatu | mikroskopicky při zvětšení 1 : 200 až 300 |
| | (u každého ejakulátu) | a při teplotě 39 ± 1 °C, kdy se odhadem |
| | | zjišťuje procentické zastoupení spermií |
| | | pohybujících se vpřed za hlavičkou |
| +---------------------------------+--------------------------------------------+
| | výskyt abnormálních | mikroskopicky při zvětšení 1 : 1000 až |
| | spermií | 1500 a vyjadřuje se v %; u provozních býků |
| | | nejméně jednou za měsíc |
+----------------+---------------------------------+--------------------------------------------+
| krátkodobě *) | aktivita spermatu | jako u čerstvého spermatu |
| uchovávaného | | |
| spermatu | | |
+----------------+---------------------------------+--------------------------------------------+
| | počet aktivních spermií | v 10 čtvercích v Bürkerově komůrce tak, že |
| | v inseminační dávce | průměrný počet spermií ve čtverci se |
| | | přepočte na velikost inseminační dávky a |
| | | vynásobením počtu všech spermií procentem |
| | | aktivity se zjistí počet aktivních spermií |
| | | v inseminační dávce |
+----------------+---------------------------------+--------------------------------------------+
| dlouhodobě **) | aktivita spermatu | u každého ejakulátu na pracovišti, kde |
| uchovávaného | (po rozmrazení) | bylo sperma zmrazeno a dále u každého |
| spermatu | | ejakulátu před expedicí tak, že: |
| | | - pejeta se rozmrazí ve vodní lázni o |
| | | teplotě 39 ± 1 °C (pejeta o obsahu 0,25 ml |
| | | za 15 - 20 vteřin, o obsahu 0,50 ml za |
| | | 20 až 30 vteřin), její obsah se promíchá |
| | | a vypustí do zkumavky s roztokem citronanu |
| | | sodného, aktivita spermií se posuzuje jako |
| | | u čerstvého spermatu; |
| | | - peleta se rozpustí v malé zkumavce o |
| | | teplotě 39 ± 1 °C v roztoku citronanu |
| | | sodného a promíchá se; aktivita spermií |
| | | se posuzuje jako u čerstvého spermatu |
+----------------+---------------------------------+--------------------------------------------+
| | počet aktivních spermií | jako u krátkodobě uchovávaného spermatu |
| | v inseminační dávce | |
+----------------+---------------------------------+--------------------------------------------+
------------------------------------------------------------------
*) Vzorky jsou odebírány sterilně při teplotě 1 až 3 °C a vyšetřovány bezprostředně po přípravě.
**) Vzorky jsou odebírány sterilně při teplotě - 196 °C a vyšetřovány bezprostředně po rozmrazení.
3. Zpracování spermatu
3.1. Veškeré předměty přicházející do styku se spermatem musí být sterilní.
3.2. Produkty živočišného původu používané při ošetření spermatu musí být zdravotně nezávadné.
3.3. Sperma se ředí při pokojové teplotě 20 až 25 °C; k ředění se používají pouze média, která po konzervaci uchovávají dobrou oplozovací schopnost spermatu a jeho zdravotní nezávadnost; ředí se technologickým postupem podle pokynů výrobce ředidla.
3.4. Do spermatu jsou přidávána antibiotika tak, aby v konečném naředění bylo dosaženo nejméně těchto koncentrací:
+-----------------+----------------------------+
| na 1 ml ředidla | 500 mj streptomycinu |
| | 500 mj penicilinu |
| | 150 μg linkomycinu |
| | 300 μg spektinomycinu |
+-----------------+----------------------------+
Poznámka:
Může být použita i jiná kombinace antibiotik, pokud mají
rovnocenný účinek proti kampylobakteriím, leptospirám a
mykoplazmám.
3.5. Bezprostředně po přidávání antibiotik je ředěné sperma uchováváno nejméně 45 minut při teplotě 3 - 5 °C.
4. Uchovávání a výdej inseminačních dávek
+------+-----------------------------------+----------------------------------------------------+
| 4.1. | Sperma se po zpracování uchovává | a) krátkodobě při teplotě 1 až 3 °C |
| | | b) dlouhodobě při teplotě -196 °C |
+------+-----------------------------------+----------------------------------------------------+
| 4.2. | Krátkodobě uchovávané sperma se vydává z inseminačních stanic podle podmínek daných |
| | technologickým postupem |
+------+----------------------------------------------------------------------------------------+
| 4.3. | Dlouhodobě uchovávané inseminační dávky ve formě pejet nebo pelet se ukládají do |
| | provozního kontejneru, kde jsou trvale ponořeny v tekutém dusíku při teplotě -196 °C. |
| | Po hodnocení aktivity se inseminační dávky ukládají do zásobního kontejneru a z |
| | inseminační stanice se expeduje nejdříve po 30 dnech po odběru a zmrazení. |
+------+---------------------+------------------------------------------------------------------+
| 4.4. | Pejety jsou uloženy | a) v zásobních kontejnerech v kelímcích s vatovou zátkou dole; |
| | | v těchto kelímcích jsou uloženy odděleně podle býků a data |
| | | odběru s vloženým lístkem, na kterém je uvedena značka a |
| | | číslo státního registru a jméno býka, datum odběru, počet |
| | | uložených inseminačních dávek. V případě uložení |
| | | inseminačních dávek z více skoků do kelímků s menším průměrem |
| | | je tento údaj napsán nesmazatelnou barvou na vnější straně |
| | | kelímku. Na expediční list jsou vždy uváděna data |
| | | jednotlivých skoků, počet inseminačních dávek a státní |
| | | registr býka, |
| | | |
| | | b) v transportních kontejnerech zpravidla v kelímcích o malém |
| | | průměru, na které se uvádí stejné údaje jako v bodě a) |
| | | a které jsou vždy naplněny tekutým dusíkem, |
+------+---------------------+------------------------------------------------------------------+
| 4.5. | Pelety jsou uloženy | a) v zásobních kontejnerech v kelímcích, které se ukládají na |
| | | kovové plošinky v kanystrech a víčka kelímků jsou opatřena |
| | | třemi až čtyřmi otvory; kelímek je naplněn tak, aby nad |
| | | peletami bylo asi 7 mm tekutého dusíku, |
| | | |
| | | b) v transportních kontejnerech v kovových pouzdrech; nad |
| | | peletami je kovové závaží, pouzdra jsou uzavřena víčky a |
| | | všechny pelety jsou trvale ponořeny v dusíku |
| | | |
+------+---------------------+------------------------------------------------------------------+
| 4.6. | Kontejnery používané pro skladování a přepravu spermatu jsou náležitě desinfikovány |
| | před každým naplněním dusíkem, který nebyl použit pro jiné produkty živočišného |
| | původu. Interval desinfekce je dán typem a používáním kontejneru. |
+------+----------------------------------------------------------------------------------------+